(DHA)對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型(OA)關(guān)節(jié)軟骨組織退變的影響

　　摘要
　　骨關(guān)節(jié)炎模型,動(dòng)物模型,構(gòu)建動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),動(dòng)物造模,大鼠模型,模型大鼠
　　骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis, OA)是一種關(guān)節(jié)慢性退行性疾病，主要臨床癥狀為關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、畸形和功能障礙。
　　OA通常發(fā)生于老年人，研究表明超過(guò)一半的65歲以上老年人都有癥狀性或影像學(xué)上的OAP。OA會(huì)導(dǎo)致患者肢體殘疾和生活質(zhì)量嚴(yán)重下降，其主要治療方式包括減少關(guān)節(jié)負(fù)重、藥物治療、物理治療和手術(shù)治療。
　　二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是一種n-3多不飽和脂肪酸，與二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)相同，不飽和雙鍵起始于甲基端的第3個(gè)碳原子上。DHA和EPA的天然來(lái)源主要是海洋動(dòng)物，如貝類(lèi)、甲殼類(lèi)、魚(yú)類(lèi)，特別是鰭、鮭、鯡、沙丁魚(yú)等，是飲食中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
　　研究發(fā)現(xiàn)，DHA對(duì)多個(gè)系統(tǒng)具有廣泛而明確的抗炎作用，并應(yīng)用于包括心血管疾病、炎癥性腸病、肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝等多種炎癥性疾病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型和臨床試驗(yàn)中。但目前DHA對(duì)OA炎癥反應(yīng)的抑制活性及其對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)能力尚不清楚。
　　本研究在體外實(shí)驗(yàn)中，利用大鼠OA模型測(cè)定DHA對(duì)OA關(guān)節(jié)軟骨的影響，并測(cè)定細(xì)胞凋亡、自噬及炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)，以了解DHA對(duì)OA關(guān)節(jié)軟骨的影響及機(jī)制。
　　目的
　　研究二十二碳六烯酸(DHA)對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎(OA)關(guān)節(jié)軟骨組織退變的影響，并初步探討其機(jī)制。
　　方法
　　手術(shù)切除內(nèi)側(cè)半月板、切斷前交叉韌帶構(gòu)建大鼠OA動(dòng)物模型，并采用富含DHA的飼料喂養(yǎng)；同時(shí)采用假手術(shù)或正常飼料喂養(yǎng)進(jìn)行對(duì)照。HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、番紅O-固綠染色觀察關(guān)節(jié)軟骨組織退變程度，采用改良Mankin評(píng)分評(píng)價(jià)番紅O-固綠染色標(biāo)本關(guān)節(jié)軟骨組織損傷；采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨組織中Ⅱ型膠原的表達(dá)；采用蛋白印跡法檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨組織中哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、Beclin-1及通路蛋白磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化p38蛋白(p-p38)的表達(dá)；microCT觀察軟骨下骨的結(jié)構(gòu)變化。
　　結(jié)果
　　口服DHA減輕OA大鼠關(guān)節(jié)軟骨退變程度，并顯著降低Mankin評(píng)分；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示DHA可提高軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原陽(yáng)性表達(dá)率；蛋白印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示DHA可減少關(guān)節(jié)軟骨組織中mTOR和MMP-13的表達(dá)，并增加Beclin-1的表達(dá)；microCT顯示DHA可改善骨小梁微細(xì)結(jié)構(gòu)，減少軟骨下骨囊變及硬化；通路蛋白檢測(cè)顯示DHA可顯著抑制p-p38的表達(dá)。

　　結(jié)論
　　DHA可有效減輕OA大鼠關(guān)節(jié)軟骨退變及損傷，并改善軟骨下骨微細(xì)結(jié)構(gòu)。這一作用通過(guò)增加軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和Beclin-1的表達(dá)，并降低mTOR和MMP-13的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)。DHA的作用機(jī)制為抑制p38通路。